本方案适用于全国范围内开展“动物疫病净化示范场”、“动物疫病净化创建场”（以下简称“两场”）评估认证的种鸡场，有意愿开展动物疫病净化的鸡场可参考执行。
本指南所称“动物疫病净化示范场”是指符合《规模化养殖场动物疫病净化创建场、动物疫病净化示范场评估认证办法（试行）》规定的申请条件，并通过中国动物疫病预防控制中心组织的评审，达到特定动物疫病净化评估认证标准的养殖场。
本指南所称“动物疫病净化创建场”是指符合《规模化养殖场动物疫病净化创建场、动物疫病净化示范场评估认证办法（试行）》规定的申请条件，并通过中国动物疫病预防控制中心组织的评审，开展特定动物疫病净化的养殖场。
本指南所称“两场”评估认证是指各级动物疫病预防控制机构依据《规模化养殖场动物疫病净化创建场、动物疫病净化示范场评估认证办法（试行）》规定，对依法开办的规模化养殖场是否符合“两场”条件所进行的审查、认证等活动。
本指南主要涉及以下几种主要疫病：禽流感、新城疫、鸡白痢和禽白血病。
本指南的相应条款应作为规模化种鸡场开展疫病净化的基本要求。
养殖场参照本指南，结合本场实际，制定动物疫病净化目标和具体实施计划，分阶段实施净化工作，达到国家《规模化养殖场动物疫病净化示范场评估认证标准（试行）》中相应病种的净化评估认证标准。
养殖场依据本指南，针对不同疫病本底调查情况，一场一册制定相应净化方案。采取严格的生物安全措施、免疫预防措施、病原学检测、免疫抗体和野毒感染抗体监测，淘汰带毒鸡或鸡群，对假定阴性鸡群加强综合防控措施，逐步扩大净化效果，最终建立净化场。同时加强人流、物流管控和实行全进全出生产模式，降低疫病水平传播风险；强化本场留种和引种的检测，避免外来病原传入风险；建立完善的防疫和生产管理等制度，优化生产结构和建筑设计布局，构建持续有效的生物安全防护体系，确保净化效果持续、有效。
规模化种鸡场主要疫病净化技术路线图
种鸡场完善和健全净化综合防控措施，是鸡病净化工作的重要组成部分，是实施净化工作、达到净化目标、维持净化效果的有效手段。
种鸡场建设应按中华人民共和国农业工程建设标准《种鸡场建设标准》（NYJ/T02-2005）要求进行，生活区、生产区、污水处理区、病死鸡无害化处理区分开，各区相距不少于50米；鸡舍布局合理，育雏舍、育成舍、种鸡舍、孵化室和隔离舍等分别设在不同区域，鸡舍相互距离不小于15米。
种鸡场应设置自然或人工屏障与外界有效隔离，防止外来人员、车辆、动物随意进入鸡场。种鸡场鸡舍应有防鸟防鼠措施和设施，种鸡场应设置明显的防疫标志。种鸡场生产区门口应设置人员消毒设施，采取喷淋、雾化、负离子臭氧消毒或其他更有效的方式。开展疫病净化的种鸡场宜采用较为严格的沐浴、更衣、换鞋以及配合喷淋、雾化或负离子臭氧消毒的综合消毒方式，或其他更有效的方式，确保进入生产区人员的消毒效果。
种鸡场应配套日常物品消毒设备和水源消毒设备，每一栋鸡舍门口应设置消毒池，鸡舍入口应配有消毒盆，供出入鸡舍人员洗手消毒，必要时，种鸡场宜配备火焰消毒设备。
种鸡场应设置兽医室，配备必要的实验室仪器设备，如离心机等，以满足日常诊疗、采样和血清分离工作需要。兽医室的设置应与生产区有效隔离，除非必要，其人流、物流应不可与生产区交叉。种鸡场兽医室应配备与工作相适应的消毒设施设备，确保必要时从兽医室进入生产区的人和物经过有效的消毒处理。
种鸡场应有无害化处理设施，采用有效方式进行无害化处理。种鸡场应配备处理粪污的环保设施设备，有固定的鸡粪储存、堆放设施和场所，并有防雨、防渗漏、防溢流措施，或及时转运。
建立投入品（含饲料、兽药、生物制品）使用制度，免疫、引种、隔离、兽医诊疗与用药、疫情报告、病死鸡无害化处理、消毒等防疫制度，销售检疫申报制度、产品质量安全管理制度、日常生产管理制度、车辆及人员出入管理制度、疫病净化方案和阳性动物处置方案等。
种鸡场应实行分区饲养和全进全出生产模式，鼓励有条件的种鸡场实行分点饲养及“全进全出”的饲养工艺。根据生产需要对人流、物流、车流实行严格的控制。种鸡、孵化、育雏、育成、蛋鸡、后备鸡分群饲养，分别制定饲养标准和防疫程序。
种鸡场须建立入场和进入生产区的人员登记记录。进入生产区人员须经严格消毒，由消毒通道进入。进出鸡舍时应经消毒池进行脚部消毒和洗手消毒。外来人员禁止进入生产区，必要时，按程序批准和严格消毒方可入内。本场负责诊疗巡查和免疫的人员，每次出入鸡舍和完成工作后，都应严格消毒。尽量减少本场兽医室工作人员和物品向生产区流动，必要时需经严格消毒。
外来物品须经有效消毒后方可进入生产区，外来染疫或疑似染疫的动物产品或其他物品禁止入场。外来车辆入场前应经全面消毒，非经许可批准，禁止进入生产区。外来车辆禁止入场，外售鸡只向外单向流动。
种鸡场应有无害化处理设施及相应操作规程，并有相应实施记录。对发病鸡群及时隔离治疗，限制流动；病鸡、死鸡及其污染的禽产品应按《病死动物无害化处理技术规范》（农医发〔2013〕34号）的要求采用焚烧法、化制法、掩埋法和发酵法进行无害化处理。
种鸡场应严格做好人员、车辆、物资进入场区和生产区的消毒。养殖场的消毒设施应定期更换消毒液以保证有效成份浓度。厂区门口消毒设施的常用消毒剂有含氯消毒剂、醛类消毒剂、酚类消毒剂和季铵盐类消毒剂等。
生产区内环境，包括生产区道路及两侧、鸡舍间空地应定期消毒，常用的消毒剂有醛类消毒剂、氧化剂类消毒剂等。
生产区内空栏消毒和带鸡消毒是预防和控制疾病的重要措施。鸡舍空栏后，应彻底清扫、冲洗、干燥和消毒，有条件的鸡场最好在进鸡之前进行火焰消毒。带鸡消毒的消毒药必须广谱、高效、强力、无毒、无害、刺激性小和无腐蚀性，如碘制剂、氯制剂、离子表面活性剂等。
生活区周围环境应定期消毒，常用的消毒剂有季铵盐类、氧化剂类消毒剂等。
除上述日常预防性消毒外，必要时种鸡场应对疫源地开展紧急消毒，增加消毒频次，加强对鸡舍及其周边环境的消毒，避免病原体从鸡舍传出和扩散。种鸡场应根据种鸡场周边或本地区动物疫病流行情况，启动紧急消毒，增加消毒频率，严格控制人员和车辆出入，防止外来疫病传入。
种鸡场应根据本场制定的免疫制度，结合各病种特点、疫苗情况及本场净化工作进程，制定合理的免疫程序，建立免疫档案。同时，根据周边及本场疫病流行情况、净化工作效果、实验室检测结果，适时调整免疫程序。鼓励通过特定疫病免疫净化评估认证的种鸡场，结合自身实际，评估疫病防控成本，分种群、分阶段、有步骤地由免疫净化向非免疫净化推进。
兽医管理人员及生产人员定期（一般每天）巡查鸡群健康状况，尽早发现病鸡，及时隔离病鸡、处理死鸡、彻底消毒，采取必要的治疗措施，持续跟踪转归情况，并作相应记录。
需要开展临床解剖时，应做到定点解剖、无害化处理、填写解剖记录和无害化处理记录；确保单向流动，临床解剖人员不得立即返回生产区；必要时采集样品开展实验室检测。
开展特定动物疫病净化的种鸡场，在制定净化方案，开展净化监测和维持性监测的同时，重点做好日常疑似病例的巡查，根据净化病种不同，做好疑似病例的处理。发现疑似病例应立即采取隔离治疗、淘汰、扑杀等措施，并及时确诊。加大同群监测，必要时启动紧急免疫和加强免疫。加强消毒和生物安全措施，尽可能阻断舍间传播。
收集、了解和掌握本区域动物疫病流行情况，及时开展相应综合防控措施。必要时启动紧急消毒预案及配套措施，如减少人员外出、严控人流物流入内等，有条件的养殖场可探索预警机制。
开展动物疫病净化的种鸡场应建立一支分工明确、责任清晰、能力与岗位相当的疫病净化工作小组，确保净化工作顺利实施，出现临床病例或隐性感染时能得到及时处理。养殖场应至少配备一名专业兽医人员。场内所有员工应开展定期培训，确保相应生产和管理制度得以有效宣贯。鼓励种鸡场对场内员工开展定期体检，如患有人畜共患病的员工应将其调离生产岗位。
为实现净化目的和维持净化效果，种鸡场开展动物疫病净化之前，应根据本指南，力求健全生物安全防护设施设备、强化饲养管理、严格执行消毒措施和规范无害化处理措施，构建“规范化、制度化、设施化和无害化”的防疫和生产体系。
本指南按病种讲述各疫病净化工作中所需要经历的三个阶段，即本底调查阶段、免疫控制（或监测净化）阶段和净化维持监测阶段。有条件的养殖场可根据本场本底调查情况，自主选择进入免疫控制阶段或维持监测阶段。
（1）调查目的
掌握本场禽流感、新城疫的感染情况，了解鸡群健康状态、免疫水平，评估净化成本和人力物力投入，制定适合于本场实际情况的净化方案。
（2）调查内容
全面考察鸡场实际情况，包括基础设施条件、生产管理水平、防疫管理水平及兽医技术力量等，观察鸡群健康状况，了解本场禽流感、新城疫的流行历史和现状、免疫程序、免疫效果等，针对实际情况提出改进措施。同时通过对种鸡场的鸡群按照一定比例采样检测，掌握禽流感、新城疫带毒和免疫抗体水平情况。
本阶段，种鸡场应根据疫病的本底调查结果和净化疫病特点，采取以免疫、监测、分群、淘汰、强化管理相结合的综合防控措施，使禽流感和新城疫的临床发病得到有效控制，逐步实现免疫无疫状态，为下一步非免疫无疫净化奠定基础。
对有禽流感、新城疫临床疑似病例的鸡群和死亡鸡进行病原学监测，淘汰感染鸡，及时清除病原。通过强化免疫和免疫抗体监测，维持较高的免疫抗体水平，降低鸡群易感性，将临床发病控制在最低水平，逐步实现免疫无疫。
种鸡场应优先选用本场或区域优势毒株相对应的优质疫苗，制定禽流感、新城疫免疫程序和抗体监测计划，在保障养殖管理科学有效、生物安全措施得力和环境可靠的同时，根据抗体监测效果及周边疫情动态适时调整免疫程序，在做好种鸡群免疫的基础上，重点做好雏鸡、育成鸡的免疫。
本阶段的监测重点是后备鸡转群和开产前（或留种前）的免疫抗体监测和病死鸡的病原监测，确保种鸡群及个体良好的免疫保护屏障、跟踪鸡群病原感染情况，具体监测情况见下表。
种群
最低监测
比例
监测频率
监测
内容
监测样品
曾祖代及以上母鸡
10%(总样本量不少于200只)
后备鸡转群前检测1次,开产或留种前检测1次,40-45周龄检测1次
免疫抗体
血清
祖代母鸡
5%(总样本量不少于200只)
父母代母鸡
2%-3%(总样本量不少于200只)
种公鸡
100%
后备鸡转群前检测1次,正式采精前检测1次,40-45周龄检测1次
病死鸡
后备鸡以后
病原
组织病料
对免疫抗体不合格的种鸡群加强免疫一次，3-4周后重新采血检测，按照鸡场制定的淘汰计划，淘汰加强免疫后抗体不合格的种鸡群。
对病死鸡进行病原学监测，对病原学监测阳性和发现的禽流感或新城疫临床疑似病例，报告当地动物疫病预防控制机构，及时采集病料送省级疫控机构诊断，如确诊发生禽流感或新城疫，养殖场应配合兽医部门按照国家有关规定处理。
当种鸡群历经两次及两次以上普检和隔离淘汰，种鸡群抽检群体免疫抗体合格率达到90%以上（其中HI平均滴度≥27,群体HI免疫抗体合格率达到80%以上）；连续两年未发现禽流感、新城疫病原学阳性且未出现禽流感、新城疫临床病例，即认为达到禽流感、新城疫的免疫无疫状态，可按照程序申请净化评估认证。
有条件的养殖场，可探索哨兵动物监测预警机制，禽舍可设置非免疫育成鸡，跟踪观察，定期监测。
1）血清学检测
执行标准：GB/T18936-2003。
方法：血凝抑制试验（HI）。
2）病原学检测
执行标准：（GB/T19438.2-2004、GB/T19440-2004）以及农业部行业标准（NY/T772-2004）。
方法：采用病毒分离或禽流感病毒RT-PCR试验对于所有亚型的AIV进行检测。必要时对病毒进行分型鉴定。
执行标准：GB/T16550-2008。
方法：采用病毒分离或新城疫病毒荧光RT-PCR试验检测。通过基因测序区分野毒和疫苗毒。
了解本场禽白血病的感染情况，了解鸡群健康状态和疫病带毒情况，评估净化成本和人力物力投入，制定适合于本场实际情况的净化方案。
本阶段，种鸡场应根据本底调查结果和禽白血病特点，采取以监测、分群、淘汰、强化管理相结合的综合防控措施，将禽白血病的感染控制在最低水平甚至无疫状态，逐步清除带毒鸡，实现种群净化，达到净化状态。
病原学抽检，原种场全部为阴性，祖代场、父母代场阳性率低于1%；血清学抽检，A-B、J抗体及蛋清p27抗原检测，原种场全部为阴性，祖代场、父母代场阳性率低于1%；连续二年以上无临床病例。
1）原种鸡场
种鸡群：对同一批次的种鸡群，按以下顺序开展净化工作。依次完成多个世代的监测净化，直至建立阴性种鸡群。
②后备种鸡筛选检测：采集5～6周龄鸡血浆，分离培养ALV。选出阴性鸡，隔离饲养，作为后备种鸡。
③种鸡开产初期检测净化：选择每只种鸡开产最初的2-3枚蛋，取蛋清的混合样品，用ELISA方法检测蛋清中的p27抗原，淘汰抗原阳性鸡。其余鸡采集血浆接种DF-1细胞分离病毒，用ELISA方法检测p27抗原，淘汰阳性鸡。
④40-45周龄留种前检测净化：取每只鸡的2-3枚蛋对蛋清做p27抗原检测，淘汰阳性鸡。其余鸡采集血浆接种DF-1细胞分离病毒，用ELISA方法检测p27抗原，淘汰阳性鸡。
⑤对建立的阴性种鸡群每6个月抽检血清样品200份，监测A-B亚群抗体和J亚群抗体。
⑦第二世代鸡的检测和淘汰：经上述①～⑤步检测淘汰后种鸡的出壳的雏鸡，作为净化后第二世代鸡。继续按①～⑤的程序，实施第二世代的检测和净化。第三世代后可按此程序继续循环进行。
⑧连续进行多个世代种鸡的ALV检测与净化，直至p27抗原、A-B亚群抗体和J亚群抗体达到净化标准。
公鸡：对种鸡群配套的公鸡，按以下顺序开展净化工作。
①孵化室1日龄雏鸡检测，同母鸡（先收集胎粪一次，再鉴别雌雄）。
②第一次挑选公鸡时，采集血浆进行病毒分离检测。在开始供精之前，至少经过病毒分离检测一次，淘汰阳性鸡。
③在生产阶段采血浆进行病毒分离检测一次。采集精液后，检测精液p27抗原及接种DF1细胞分离病毒，淘汰阳性鸡。
2）祖代、父母代鸡场
对于祖代和父母代鸡场的种鸡群和公鸡，按照以下要求开展净化，监测情况见下表。
开产后25-30周龄检测种蛋或血清
A-B、J抗体，p27抗原
每只种鸡检测2枚种蛋
正式采精前检测1次
p27抗原
血清或精液
对带毒鸡应及时淘汰，加强同群鸡的监测，直至建立本场阴性种鸡群。
原种鸡场，连续3个世代未分离到外源性禽白血病，祖代场、父母代场病原阳性率低于1%；抽检A-B、J抗体，原种场全部为阴性，祖代场、父母代场阳性率低于1%；连续两年以上无临床病例，即认为达到禽白血病净化状态，可按照程序申请净化评估认证。
种鸡场达到禽白血病净化状态或通过农业部评估认证后，可开展维持性监测。原种鸡场，从逐只鸡分离病毒，改为在开产后按一定比例（如5%-10%）检测血清抗体和蛋清p27抗原,如无阳性，可逐年减少检测比例；祖代和父母代鸡场从无白血病鸡场引种连续2年，可按5%-10%比例进行维持性监测。
p27抗原和A-B、J抗体的检测应优先选择ELISA方法，或其他有效可靠的方法。
掌握本场鸡白痢的感染情况，了解鸡群健康状态和疫病带毒情况，评估净化成本和人力物力投入，制定适合于本场实际情况的净化方案。
全面考察鸡场实际情况，包括基础设施条件、生产管理水平、防疫管理水平及兽医技术力量等，观察鸡群健康状况，了解本场鸡白痢流行历史和现状、免疫程序、免疫效果等，针对实际情况提出改进措施。同时通过对种鸡场的鸡群按照一定比例采样检测，掌握鸡白痢感染情况。
本阶段，种鸡场应根据疫病的本底调查结果和净化疫病特点，采取以监测、分群、淘汰、强化管理相结合的综合防控措施，将鸡白痢的临床发病控制在最低水平甚至无疫状态，逐步清除感染鸡，实现种群净化，达到鸡白痢净化状态。
血清学抽检，原种场全部为阴性，祖代种鸡场阳性率低于0.2%，父母代种鸡场阳性率低于0.5%，种公鸡全部为阴性；连续两年以上无临床病例。
本阶段的监测重点是后备鸡转群和开产前的感染抗体监测、死胚或弱雏的细菌分离监测，具体监测情况见下表。
检测样品
后备鸡阶段检测1次,开产前检测1次
抗体
死胚或1日龄弱雏
每月检测1次
细菌分离
监测期间，如发现种群鸡白痢阳性异常升高，应及时分析管理因素及技术因素，加大监测密度，评估生物安全措施有效性，评估感染风险。
对发现的感染鸡应及时淘汰、扑杀，加强同舍鸡群监测。
曾祖代及以上连续3代血清学检测全部为阴性，祖代种鸡场鸡白痢血清学阳性率低于0.2%，父母代种鸡场阳性率低于0.5%；种公鸡的鸡白痢血清学全部为阴性，连续两年以上无临床病例，即认为达到鸡白痢净化状态，可按照程序申请净化评估认证。
种鸡场达到鸡白痢净化状态或通过农业部评估认证后，可开展维持性监测。曾祖代及以上连续3代血清学检测全部为阴性，可按5%-10%比例进行监测。祖代和父母代鸡场从无白痢鸡场引种连续2年，可按5%-10%比例进行监测。
执行标准：可参照NY/T536-2002。
方法：采用平板凝集试验检测血清或全血。
方法：采用病原分离方法分离和鉴定鸡白痢。
严格执行卫生防疫制度，全面做好清洁和消毒；严格执行生物安全管理措施，实行人员进出控制隔离制度；规范饲养管理行为。
根据本地区和本场疫病流行情况，依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关法律法规的要求，制定免疫程序，并按程序执行。通过净化评估认证的企业，根据自身情况可逐步退出免疫，实施非免疫无疫管理。如净化维持期间监测发现隐性感染或临床发病，应及时调整免疫程序，必要时全群免疫，加大监测和淘汰力度，实行全进全出，严格生物安全操作，维持净化效果。
净化鸡群建立后，定期开展监测，以维持净化鸡群的健康状态。