非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法&东胜龙eQ162C荧光定量(qPCR)仪实验数据东胜龙

Real-timePCRassayfordetectionofAfricanswinefevervirus中国兽医协会发布

前言

非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法

eQ162C便携式荧光定量PCR检测系统

极简·易用

eQ162C

技术参数

通量及耗材

16*0.2ml,0.2ml8联管*,单管

(对管盖无透明要求,管盖可用mark笔标记)

反应体系

5-100μl

动力学范围

1-1010Copies

检测灵敏度

1Copy

荧光检测通道

通道1:FAM通道2:HEX/JOE(特殊波长可定制)

变异系数

CV≤3%

≥0.98

检测传感器

高灵敏度PMT

模块温度设置范围

10-99.9℃

热盖温度设置范围

30-105℃、自动热盖

控温技术

半导体制冷器、Tube模拟试管智能控温

最大升降温速率

≥4℃/s

平均升降温速率

2.5℃/s

模块控温精度

≤0.1℃

温度准确度

≤0.2℃

模块温度均匀性

≤±0.2℃(@55℃)

指示灯

电源、热盖开盖、运行中、通讯、UV处理中、故障

DNA有限降解

可选内置UV紫外光源(注:有限降解处理不能替代灭菌处理)

信号接口

RS232C(用户自配计算机)

输入电源

100-240VAC300VA

分析软件

eQ162CV1.0及以上运行环境windows7/10

软件功能

系统参数设置(有密码权限)、PCR定量实验设置、样本信息输入、运行管理、导出EXCEL、导入LIS(需定制接口)

分析功能

标准曲线、定量分析

输出报告

自定义报告模板、结果判断及荧光分析曲线、报告打印、预置动物/人类报告模板

正常工作条件

环境温度10-30℃、相对湿度:20-85%RH、海拔不高于2000m

外形尺寸

(L×W×H)297×210×140mm

净重

5.6Kg

附录A(规范性附录)试剂的配制

附录C(规范性附录)非洲猪瘟病毒核酸阳性及阴性对照

C.1阳性对照阳性对照制备方法:人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段,序列参见附录B,将VP72基因连接于pMD20-T载体制成阳性质粒pMD20-T-VP72,使用非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液将质粒稀释至浓度为10000copies/L,保存于-20℃备用。C.2阴性对照阴性对照为非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液。附录D(规范性附录)实时荧光PCR反应液配方

实时荧光PCR反应液配方见表D.1。

表D.1实时荧光PCR反应液配方

组分

1个检测体系的加入量

2×PCR缓冲液a

12.5μL

dNTP(2.5mmol/L)

1.0μL

上游引物(10μmol/L)

下游引物(10μmol/L)

探针(10μmol/L)

Taq酶b(5U/μL)

0.5μL

去离子水

3μL

总体积

20μL

2×PCR缓冲液a:参见附录A.1配方。

Taq酶b:具有5’→3’外切活性。

附录E(资料性附录)非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例参考

THE END
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